Nieinwazyjna diagnoza odrzucenia nerkowego aloprzeszczepu przez pomiar RNA dla perforiny i Granzyme B w moczu ad

Niedawne udoskonalenia zmniejszyły, ale nie wyeliminowały powikłań związanych z biopsją, takich jak krwiomocz, bezmocz, krwiak obwodowy, krwawienie i wstrząs, przetoki tętniczo-żylne i utrata przeszczepu. 9-11 Błędy pobierania próbek stanowią dodatkowy problem i dlatego potrzebne są liczne próbki, aby zwiększyć dokładność diagnostyczna.12-15 Opracowanie dokładnego, nieinwazyjnego testu diagnostycznego, który również dostarczy wgląd w mechanizmy odrzucania, będzie miało znaczną wartość. Opracowaliśmy konkurencyjny, ilościowy test reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR), który pozwala na nieinwazyjną diagnozę odrzucenia alloprzeszczepu na poziomie molekularnym. Oceniliśmy dokładność diagnostyczną pomiaru poziomu messenger RNA (mRNA) perforyny i granzymu B w komórkach moczowych od biorców allograftu nerkowego. Mierzyliśmy mRNA perfryny, białka tworzącego pory, 16 i mRNA granzymu B, peptydazy seryny, 17 ponieważ te białka są integralnymi składnikami litycznej maszynerii komórek cytotoksycznych, 18-23 i komórki cytotoksyczne są często obecne w alloprzeszczepy, które ulegają ostremu odrzuceniu.24
Metody
Pobieranie próbek moczu i próbek pobranych z biopsji nerkowej
Zebraliśmy 151 próbek moczu (110 w pierwszym miesiącu po przeszczepie, 24 jeden do sześciu miesięcy po transplantacji i 17 więcej niż sześć miesięcy po przeszczepie) od 85 biorców allograftu nerkowego. Trzydziestu ośmiu z tych pacjentów poddano biopsji igłowej (otrzymując 44 próbki) w celu zidentyfikowania podstawy dysfunkcji przeszczepu; mocz pobierano przed każdą biopsją. Próbki biopsyjne utrwalono w formalinie, zatopiono w parafinie i wybarwiono hematoksyliną i eozyną, kwasem nadjodowym Schiff lub trichromem Massona. Okazy zostały poddane przeglądowi i sklasyfikowane przy użyciu klasyfikacji Banff 9712 przez pojedynczego patologa, który nie znał wyników badań molekularnych. Na podstawie wyników badań histologicznych 24 próbki nerki z biopsji od 22 biorców (średnia [. SD] wieku, 44 . 15 lat, 10 kobiet i 12 mężczyzn) zostały sklasyfikowane jako wykazujące ostre odrzucenie, 5 próbek od 5 biorców (średni wiek, 52 . 17 lat, 3 kobiety i 2 mężczyzn) zostały sklasyfikowane jako wykazujące przewlekłą nefropatię aloprzeszczepową, a 15 próbek od 11 biorców (średni wiek, 50 . 13 lat, 2 kobiety i 9 mężczyzn) sklasyfikowano jako wykazujące inne wyniki zgodnie z Banffem 97 klasyfikacji. Siedem z 15 próbek wykazywało toksyczną tubulopatię, 4 miało niespecyficzne zmiany, 3 wykazywało ostrą cewkową martwicę, a miało oznaki zakrzepicy żył nerkowych.
Pozostałe 107 próbek moczu pochodziło od 47 pacjentów, którzy zostali sklasyfikowani jako posiadający stabilną funkcję alloprzeszczepu po transplantacji (średni wiek, 47 . 12 lat, 12 kobiet i 35 mężczyzn). U tych pacjentów stężenie kreatyniny w surowicy albo spadło albo nie zmieniło się o więcej niż 0,2 mg na decylitr (18 .mol na litr) w ciągu siedmiu dni przed i po siedmiu dniach od pobrania moczu. Sekwencyjne próbki moczu uzyskano od 37 pacjentów (średni wiek, 46 . 12 lat, 14 kobiet i 23 mężczyzn) w ciągu pierwszych dziewięciu dni po transplantacji.
Jedenastu z 85 biorców allograftu nerkowego (średni wiek, 52 . 13 lat, kobieta i 10 mężczyzn) miało upośledzoną funkcję przeszczepu w pierwszym tygodniu po przeszczepie i wymagało leczenia dializacyjnego w tym czasie
[więcej w: fonastenia, wodonercze obustronne, torbiel galaretowata ]
[podobne: olej kokosowy na białe zęby, próba rinnego, pryskające bańki jeja ]